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芽孢數測定方法

（ATCC 7953、ATCC12980嗜熱脂肪桿菌）

準備器具：                                           推薦培基：

攪拌器                                           Soybean-Casein Digest Agar

（以下物品需滅菌）                                      [Formula]

玻璃球（直徑5-6mm）                                               Casein Peptone       15g/L

Buffer：生理食鹽水（含0.1%Tween80）                                     Soybean Peptone      5g/L

有蓋子的試驗管或離心用TUBE（CORNING）                                 NaCl                  5g/L

培養皿（SCDA培養基）、定量吸管等                                       Agar                  15g/L

                                                Final pH7.1～7.5

芽孢測定方法（室溫）（涂抹法）（嗜熱脂肪桿菌是微好氧菌）

1. 將BI菌紙1條、玻璃球20個和Buffer10ml放入容器（有蓋子的試驗管等）內，浸10分鐘以上。

2. 將容器放在攪拌器上振蕩攪拌，至菌紙完全粉碎為止。攪拌數分鐘以目視判斷。然后靜置30分鐘以上，再次振蕩攪拌。

3. 用Buffer稀釋。

4. 最終稀釋完的試驗管放入95-100℃的開水中浸15分鐘（殺滅發芽的菌體）。加熱完后馬上用自來水沖加以冷卻。

5. 最終稀釋液注入3個培養皿培基的表面（培基要提前2-3日做好，讓培基表面干燥），每個注入0.1ml，用涂抹棒將芽孢稀釋液涂抹均勻，靜置兩小時以上使芽孢稀釋液被培養基完全吸收，然后放入培養器。55-60℃培養48小時后計數菌落，按照稀釋倍率計算芽孢數（求3個培養皿的平均值）。

計算例子：

菌落數為30時

菌數：30×10⁵＝3.0×10⁶